生物胺是一類具有生物活性的含氮低分子量有機化合物,其可看作是氨分子中1~3個氫原子被烷基或芳基取代后而生成的物質(zhì),是脂肪族、酯環(huán)族或雜環(huán)族的低分子量有機堿。它們廣泛存在于動植物體內(nèi)及食品中,尤其是發(fā)酵食品(如奶酪、葡萄酒、啤酒、米酒、發(fā)酵香腸、調(diào)味品)、水產(chǎn)品以及肉類產(chǎn)品中。
根據(jù)組成成分,生物胺可以分為單胺和多胺。單胺包括組胺、酪胺、色胺、苯y(tǒng)胺等;多胺包括尸胺、腐胺、精胺和亞精胺。此外,根據(jù)結(jié)構(gòu),生物胺還可以分為脂肪胺、芳香胺和雜環(huán)胺;根據(jù)來源,則可分為內(nèi)源性生物胺和外源性生物胺。
生物胺是一類含氮的有機化合物,廣泛存在于食品、生物體和環(huán)境中。以下是一些常見的生物胺檢測方法:
1、高效液相色譜法(HPLC)
原理:通過選擇合適的色譜柱、流動相和檢測器,利用樣品中不同物質(zhì)的分離系數(shù)和吸附性質(zhì)的差異來實現(xiàn)分析。由于生物胺既不具有可見光吸收峰,也不具有紫外光吸收峰,因此它們不能容易地被普通的UV-Vis檢測器檢測到。在測試之前通常需要預(yù)衍生化步驟。常用的衍生化試劑是丹磺酰氯。
特點:靈敏度高、分辨率好、重現(xiàn)性強,適用于多種生物胺的定性和定量分析。但該方法需要復(fù)雜的設(shè)備、昂貴的試劑和熟練的操作人員。
2、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
原理:利用抗體和抗原的反應(yīng)來檢測生物胺的存在。首先,將待測生物胺與特異性抗體反應(yīng),然后加入酶標(biāo)記的二抗,通過酶的催化作用產(chǎn)生顏色變化或其他信號,從而判斷生物胺的有無和多少。
特點:操作簡便、靈敏、實時性強,適用于現(xiàn)場快速檢測或?qū)崟r監(jiān)測等場合。但該方法只能檢測特定的生物胺,且可能存在交叉反應(yīng),導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性。
3、薄層色譜法(TLC)
原理:通過選擇合適的固定相和展開劑,將生物胺在薄層板上進行有效分離,然后利用顯色劑對生物胺進行顯色,通過比較標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的斑點位置和顏色深淺,可以初步判斷生物胺的種類和含量。
特點:簡單、快速、成本低,可用于食品中生物胺的定性和半定量分析。但該方法對設(shè)備要求不高,且無法準(zhǔn)確測定生物胺的含量。
4、毛細管電泳法(CE)
原理:以高壓電場為驅(qū)動力,使樣品中的帶電粒子在毛細管中進行分離。按分離原理的不同,CE可分為毛細管區(qū)帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學(xué)毛細管電泳等,其中,毛細管區(qū)帶電泳和膠束電動力學(xué)毛細管電泳常用于生物胺檢測。
特點:操作簡單、進樣量少、分離速度快、靈敏度高,但其重現(xiàn)性和檢出限都不如高效液相色譜(HPLC)。
5、氣相色譜法(GC)
原理:利用氣體作為流動相,將樣品中的生物胺分離并檢測。生物胺在氣相色譜儀中經(jīng)過柱分離后,通過檢測器檢測出其濃度。
特點:靈敏度高、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可同時檢測多種生物胺的含量。但該方法需要復(fù)雜的樣品前處理過程,且不能現(xiàn)場操作。
6、生物傳感器法
原理:基于生物識別元件與生物胺特異性結(jié)合的機制,通過制備針對特定生物胺的生物識別元件,實現(xiàn)對生物胺的快速、靈敏檢測。例如,電化學(xué)生物傳感器法是將酶、細胞、組織、抗體、抗原等生物活性物質(zhì)作為分子識別固定在電極表面,利用生物分子之間的特異性作用將目標(biāo)分子捕獲,再通過換能器將濃度信號轉(zhuǎn)換為電信號。
特點:操作簡便、實時性強,適用于現(xiàn)場快速檢測或?qū)崟r監(jiān)測等場合。但該方法的靈敏度可能受到環(huán)境條件、酶的穩(wěn)定性等因素的影響。